您好，歡迎來到上海研謹生物科技有限公司！
13585717991
021-65232515
您好，歡迎來到上海研謹生物科技有限公司！
13585717991
021-65232515
流感病毒H5亞型檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：q流感病毒H5亞型檢測試劑盒檢測試劑盒（實時熒光PCR法）
英文名稱：Avian Influenza Virus H5 hemagglutinin subtypes Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于q流感病毒H5亞型檢測，可用于臨床q流感感病毒H5亞型感染的輔助診斷，但不作確診使用。
【檢驗原理】
本試劑盒針對q流感病毒H5亞型基因組高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針，在反應體系中含q流感病毒H5亞型基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出，實現(xiàn)檢測結果的定性分析。
【主要組成成份】
序號 | 組成 | 25T/盒 | 50T/盒 |
1 | q流感H5 RT-PCR反應液 | 375 μL×1管 | 750 μL×1管 |
2 | q流感H5逆轉錄酶 | 50 μL×1管 | 100 μL×1管 |
3 | q流感H5 Taq酶 | 75 μL×1管 | 150 μL×1管 |
4 | q流感H5陽性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
5 | q流感H5陰性對照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |
6 | 說明書 | 1份 | 1份 |
注：陰性對照為人基因組DNA，陽性對照為失去活性的q流感病毒H5亞型cDNA。
【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期12個月。
【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。
【樣本要求】
1.取咽喉拭子、泄殖腔拭子或血液樣本，禽肉取肌肉或內臟樣本，樣本處理方法參照相關文獻資料。
2.樣本采集后應立即檢測，若不能立即檢測，應置于-80℃冷凍保存，避免反復凍融，用干冰或液氮運輸。
【檢驗方法】
1. 試劑準備（試劑準備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。
（2）核算當次實驗所需要的反應數(shù)（n），并根據(jù)如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。
n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數(shù)
單反液配制表（1T） | RT-PCR反應液 | 15.0 μL |
逆轉錄酶 | 2.0 μL | |
Taq酶 | 3.0 μL |
（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。
2.樣本準備（樣本處理區(qū)）
用本公司病毒核酸 提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μL、終體積25 μL/管，蓋好PCR反應管蓋，混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25 μL/管，蓋好PCR反應管蓋，混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。
4.PCR（PCR擴增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。
反應體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集q流感H5亞型熒光信號 |
PCR 反應 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
反轉錄 | 42℃：10分鐘（min） | 1 | |
預變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 | |
預擴增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
55℃：40秒（s） | |||
PCR擴增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
55℃：40秒（s） （此階段結束時采集熒光信號） |
（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數(shù)進行PCR擴增。
注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正，設置淬滅基團選擇None。
【陽性判斷值或者參考區(qū)間】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。
（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數(shù)增長期。
2.標本結果判定：
（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數(shù)增長期，則判定為陽性，否則為陰性。
（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。
【檢驗結果的解釋】
通道及檢測結果 | 標本檢測結果解釋 |
FAM | |
陽性（+） | 標本中檢出q流感病毒H5亞型RNA |
陰性（-） | 標本中未檢出q流感病毒H5亞型RNA |
【檢驗方法的局限性】
1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的最di檢出*可能會發(fā)生假陰性的結果。
2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結果。
3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染，則容易得到假陽性結果。
【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品的最di檢出限為102 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤5%。
【注意事項】
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在第一次使用前應全部轉移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器擴增相關參數(shù)應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗外包及論文潤色服務，協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實驗代做服務：
|
| ||
聯(lián)系電話：服務熱線：400-665-0203
聯(lián)系人：楊小姐
聯(lián)系傳真：QQ：847724139（微信同號）
聯(lián)系郵箱：yanjinbio@163.com
聯(lián)系地址：上海市北青公路6725弄6號2幢2層B區(qū)
微信公眾號-關注我們最新動態(tài)
