您好,歡迎來到上海研謹生物科技有限公司!
13585717991
021-65232515
禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)ELISA試劑盒說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定禽血清,血漿及相關(guān)液體樣本中禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)水平。
實驗原理:
本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法(ELISA)測定標(biāo)本中禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)水平。用純化的禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)的存在與否。
試劑盒組成:
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1個 1個
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
陰性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
陽性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶標(biāo)試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
濃縮洗滌液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟:
編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為禽病毒性關(guān)節(jié)炎抗體(AVA-Ab)陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
公司有詳細大量關(guān)于ELISA試劑盒、ELISA原理ELISA批發(fā)和試劑盒說明書,購買ELISA試劑盒還可以享受免費代測服務(wù)您只需要把標(biāo)本寄給我們,一星期左右就可以出實驗數(shù)據(jù)。*期間還有精美禮品贈送,歡迎進入公司。上海研謹生物公司ELISA價格公道合理,實驗過程免費提供,有質(zhì)量問題可包退包換。
人內(nèi)嗎啡肽-2(EM-2)ELISAKit
人α-內(nèi)嗎啡肽(α-EP)ELISAKit
人抑制素(INH)ELISA Kit
人神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA Kit
人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISAKit
人促睡眠肽(DSIP)ELISAKit
人6-羥多巴胺(6-OHDA)ELISAKit
人心納素(ANF)ELISAKit
人神經(jīng)髓鞘蛋白(p2)ELISAKit
人精氨酸加壓素(AVP)ELISA Kit
人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISAKit
人微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)ELISAKit
人神經(jīng)絲蛋白(NF)ELISA Kit
人利鉀尿肽(KP)ELISA Kit
人神經(jīng)降壓素(NT)ELISAKit
人神經(jīng)激肽B(NKB)ELISAvKit
人強啡肽(Dyn)ELISAKit
人腦啡肽(ENK)ELISA Kit
人γ肽(Pγ)ELISAKit
人C型鈉尿肽(CNP)ELISAKit
人阿立新A(Orexin A)ELISA Kit
人神經(jīng)肽Y(NP-Y)ELISAKit
人腦腸肽(BGP/Gehrelin)ELISAKit
人乙酰膽堿(ACH)ELISAKit
人腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)ELISA Kit
人細胞角蛋白20(CK20)ELISAKit
人β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA Kit
人N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA Kit
人前心鈉肽(Pro-ANP)ELISA Kit